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邱伟将早已经准备好的一份份实验数据送了过来。
许秋接过,仔细翻看。
在埃米尔唯一一次复现之后,各个组,都根据许秋的要求,开始调整不同的实验手段。
比如eLIsa法检测抗嗜沫凝聚杆菌IggIgm抗体……
然而最终的结果,d值始终小于.1,这提示完全没有特异性抗体结合!
此外,esternB1ot分析中,倒是差点取得了成绩。
莫雷蒂组,在65kda处出现微弱条带!
然而令人遗憾的是,质谱鉴定为细菌hsp6!
这并不是致病性抗体,与嗜沫凝聚杆菌没有半点关系!
“失败的原因,大概率是因为hsp6与人类hsp6同源性高,导致交叉反应……”许秋分析。
因而第三轮改良,许秋又针对免疫荧光染色做出改动,尝试定位活菌!
手法也很简单。
先,是细菌固定与载片制备。
活嗜沫凝聚杆菌悬液用4%多聚甲醛固定15分钟,随后滴加1微升至聚赖氨酸包被的载玻片,室温干燥……
随后进行封闭与抗体孵育、封闭液,采取3%Bsa-pBs封闭3分钟。
一抗,利用患者血清1:5稀释,湿盒内37摄氏度孵育1小时。
二抗则FITc标记抗人Igg,避光孵育1小时……
最终,在激波长488n荧光显微镜下,现了微弱背景荧光!
而同一时间,放射性标记活菌追踪却让人绝望。
18F-Fdg标记、sd大鼠经尾静脉注射18F-Fdg标记菌悬液建立动物模型,最后peT-cT成像……
然而,不管是实验组还是对照组,都没有显示任何特异性放射性浓聚灶!
“各个组别,结果表现都比较一致,即便有反应,也是交叉反应……与嗜沫凝聚杆菌无关。”邱伟道。
说实话,此时他有点怀疑,嗜沫凝聚杆菌致病的研究方向是不是搞错了。
唯一有点用的,大概就是免疫荧光染色现的微弱荧光了……迄今为止,都没法确定这种微弱荧光来自哪儿,究竟是致病菌的抗原抗体结合,还是说——又是一个误会?
而就在这时候,许秋却是放下了这些资料,他抬起头来,起身往外走去,道:“走吧,复现的办法我基本上已经猜到了,接下来结束这场实验。”
听到这话,邱伟霍然睁大眼睛,脸上尽是惊骇与狂喜!
。
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