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直接在尾静脉注射FITc-右旋糖酐标记血管、注射罗丹明B标记细胞外间隙就行了。
没什么技术含量,研究生都能轻松驾驭。
“接下来,需要监测四项指标。”许秋说道。
其一,血脑屏障完整性。
这个很简单,直接用双光子实时成像血管渗漏就行。
第二,紧密连接蛋白-5。
-5是神经功能的守门人,从某种方面来说,血脑屏障的完整性与它有着密不可分的关系。
可以说,这个实验的重要指标,基本上都是靠-5验证的。
而检测-5本身,则是主要是靠免疫组化+esternb1ot(脑微血管)。
随后,是小胶质细胞活化,在皮层进行Iba-1免疫荧光。
最后则是血清血脑屏障修复机制,利用气相色谱-质谱来判断,其涉及到了丁酸、乙酸的浓度,以及至关重要的-5基因敲除!
“这个方案……也做出了很多优化啊。”莫雷蒂有些愕然。
赖光圳等人也不禁点头,目中有着钦佩之色。
许秋的方法,和常规法子比起来,优势大上不少。
比如检验血脑屏障的完整性这一点。
常规手法,是监测分辨菌群的丰度。
而许秋则改换成了双光子实时成像血管渗漏,优点显而易见,便是可以动态观测血脑屏障修复过程。
其次,短链脂肪酸修复血脑屏障这一点,许秋对-5基因的敲除,堪称妙笔。
没有了-5基因,小鼠的血脑屏障应当会濒临崩溃。
此时补充短链脂肪酸,若是能够见到血脑屏障渗漏有所改善,则能证明,短链脂肪酸能够修复血脑屏障!
另外,监测小胶质细胞活化也有着巨大优势。
常规方法,只会在实验前、实验后查一次神经炎症。
但,活体小胶质细胞成像却可以实时追踪神经炎症消退。
这能清晰地反应阿克曼菌、短链脂肪酸等等在抗炎方面挥的作用!
很快,各组实验小鼠都依然准备完毕。
第一件要做的事情,就是确定阿克曼菌已经定值成功,且血清丁酸上升。
经过检测,实验组的阿克曼菌,翻了将近七百倍。
而对照组用的是生理盐水,并无明显变化。
血清丁酸方面,实验组小鼠达到了85个单位,说明血清中丁酸含量已经达到可用的标准。
随后,是检测血脑修复的证据!
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