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作为同时掌握着「二十年免疫疗法研经验」「免疫学文献库(初级)」以及「分子模拟机制精通」的医生,许秋对这台实验的了解非常之深刻。
不需要谁认可,也不必证明,他给出的方案、做出的改良便是最合适的。
因而,许秋很快进入了下一步。
整个实验,一共有两个目标,或者是任意一个。
要么,证明彭月娇的血清可以和嗜沫凝聚杆菌特异性结合。
要么就找到让两者结合的办法。
实现任何一个,或许都能掲示彭月娇怪病的真相。
因而眼下,在第一步提取完抗体后,接着,就是鉴定抗原了。
“先声破碎?”
段善继下意识地把自己代入了实验者的视角。
一般到了这一步,都是将灭活菌体声破碎后,直接进行sds-page分离,考马斯蓝染色寻找差异条带。
随后,对显色条带进行常规Lc-ms质谱鉴定,以及对比已知蛋白数据库……
但许秋这次的操作显然依然不同。
“为什么?”
轻车熟路之后,段善继直接就开口询问了。
这次他倒是没有这么尴尬了。
许秋也没有多说什么,手中动作不停的同时,给出了解答:“声破碎灭活菌体,直接跑sds-page找差异条带的话,这个过程中膜蛋白与脂多糖在电泳中迁移异常,关键抗原可能未被分离。
“而且,常规Lc-ms无法解析脂多糖复杂糖链结构。
“这个过程中还会忽略翻译后修饰,如糖基化等对表位的影响。
“风险的话不言而喻,便是错误锁定某个膜蛋白为交叉反应抗原,误导机制研究。”
简单来说,就是没有揪出真正的“病根”,寻仇寻错对象了!
而许秋采取的手法,也很刁钻。
他先利用Tritonx-114两相分离,采取“先去除可溶性蛋白”,“后富集膜相关成分”的策略。
这可以将遗漏的多糖复杂糖链结构给找出来。
其次,苯酚-水法提取Lps,对性地获取细菌脂多糖。
其可以锁定锁定半乳糖胺a-1,3连接为关键表位,直接消除了糖基化等对表位的影响。
而最后便是专攻糖链结构解析了。
常规质谱擅长蛋白而非糖脂,但许秋利用负离子模式maLdI-TFTF法,能在短时间内迅锁定真正的致病因子。
这就像是大海捞针,以及给对方装上跟踪装置后再去追踪……
高下立判。
段善继此时已经有些愕然了。
他咽了下口水,道:“这能提高多少度?”
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